微生物的染色實(shí)驗(yàn)課堂報(bào)告范文

　　一、實(shí)驗(yàn)題目：

　　微生物的革蘭氏染色

　　二、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?/strong>

　　1、學(xué)習(xí)并初步掌握革蘭氏染色法；

　　2、了解革蘭氏染色的原理；

　　3、鞏固顯微鏡的使用。

　　三、實(shí)驗(yàn)原理：

　　革蘭氏染色是1884年丹麥病理學(xué)家Christain Gram氏創(chuàng)立的，是細(xì)菌學(xué)中最重要的鑒別染色法。染色步驟分為四個(gè)部分：

　　1、初染：加入堿性染料結(jié)晶紫固定細(xì)菌圖片；

　　2、媒染：加入碘液，碘與結(jié)晶紫形成一種不溶于水的復(fù)合物；

　　3、脫色：利用有機(jī)溶劑乙醇或丙酮進(jìn)行脫色；

　　G-和G+細(xì)胞壁的比較：

　　1、陽(yáng)性（G+）菌細(xì)胞壁特點(diǎn)：細(xì)胞壁厚，只有一層，主要由肽聚糖構(gòu)成，肽聚糖含量高，結(jié)構(gòu)緊密，脂類含量低。當(dāng)乙醇脫色時(shí)，細(xì)胞壁肽聚糖層孔徑變小，通透性降低，結(jié)晶紫和碘的復(fù)合物被保留在細(xì)胞壁內(nèi)，復(fù)染后仍顯紫色（如芽孢桿菌）。

　　2、陰性（G-）菌細(xì)胞壁特點(diǎn)：細(xì)胞壁薄，由兩層構(gòu)成，內(nèi)壁層和外壁層，細(xì)胞壁中脂類中脂類物質(zhì)含量較高，肽聚糖含量較低，網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)交聯(lián)程度低，乙醇脫色時(shí)溶解了脂類物質(zhì)，通透性增強(qiáng)，結(jié)晶紫與碘的復(fù)合物易被乙醇抽提出來，因此，革蘭氏陰性菌細(xì)胞被脫色，當(dāng)復(fù)染時(shí)，脫掉紫色的細(xì)胞的細(xì)胞壁又著上紅色（例如大腸桿菌）。

　　四、實(shí)驗(yàn)器材：

　　1、菌種：大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌。

　　2、溶液和試劑：革蘭氏染液、草酸銨結(jié)晶紫染液、碘液、95%乙醇、番紅復(fù)染液、水。

　　3、儀器及其他用品：酒精燈、載玻片、顯微鏡、接種環(huán)、試管架、濾紙、滴管。

　　五、實(shí)驗(yàn)步驟：

　　1、取一個(gè)載玻片，將其洗凈并沿一個(gè)方向擦拭干凈，直至液體不再其上收縮為止；將接種環(huán)整平，用灼燒過的接種環(huán)在混勻的菌種中取菌，按常規(guī)方法圖片，應(yīng)涂大，不宜過厚。

　　2、打開酒精燈，用火焰固定，不宜烤得太狠，否則菌種呈假陽(yáng)性。

　　3、輕旋結(jié)晶紫染液滴管，將其旋出，滴加1滴草酸銨結(jié)晶紫染液覆蓋涂菌部位（輕晃使其完全覆蓋），染色40s。

　　4、染色完成后傾去染液，水洗至流出水為無(wú)色。

　　5、將玻片上殘留水用濾紙吸去，待其干燥。

　　6、在涂菌部位滴加碘液，覆蓋1min。

　　7、媒染完成后，傾去碘液，水洗至流出水無(wú)色。

　　8、將玻片上殘留水用濾紙吸去，待其干燥。

　　9、將載玻片放在白色筆記本上，用滴管滴加95%乙醇脫色，脫色30~40s，不宜脫色太狠，否則菌種呈假陰性。

　　10、脫色完成后立即用水洗去乙醇。

　　11、將玻片上殘留水用濾紙吸去，待其干燥。

　　12、滴加番紅復(fù)染液，染色4min。

　　13、染色完成后，水洗至流出水無(wú)色。

　　14、吸去殘留水并晾干。

　　15、用顯微鏡觀察并繪圖。

　　用以上步驟完成：大腸桿菌和枯草芽孢桿菌的混合圖片染色、大腸桿菌單獨(dú)菌種染色、金黃色葡萄球菌單獨(dú)菌種染色。

　　六、注意事項(xiàng)：

　　1、選用活躍生長(zhǎng)期菌種染色，老齡的革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌會(huì)被染成紅色而造成假陰性。

　　2、圖片不宜過厚，以免脫色不完全造成假陽(yáng)性。

　　3、脫色是革蘭氏染色是否成功的關(guān)鍵，脫色不夠造成假陽(yáng)性，脫色過度造成假陰性。

　　七、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論：

　　1、結(jié)果：

　　繪出高倍鏡下觀察的菌體圖像。

　　2、思考題：

　　（1）寫出常見的革蘭氏陽(yáng)性菌與陰性菌，包括致病菌。

　　（2）革蘭氏染色的原理是什么？印象因素有哪些？

　�。�3）如何驗(yàn)證你的染色結(jié)果是否正確？