微生物實(shí)驗(yàn)報(bào)告（精選7篇）
在現(xiàn)實(shí)生活中，報(bào)告有著舉足輕重的地位，報(bào)告中提到的所有信息應(yīng)該是準(zhǔn)確無誤的。那么什么樣的報(bào)告才是有效的呢？以下是小編為大家收集的微生物實(shí)驗(yàn)報(bào)告，供大家參考借鑒，希望可以幫助到有需要的朋友。
微生物實(shí)驗(yàn)報(bào)告 1
實(shí)驗(yàn)名稱：
觀察洋蔥表皮細(xì)胞。
實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?/strong>
1、學(xué)習(xí)制作洋蔥表皮玻片標(biāo)本。
2、學(xué)會(huì)使用顯微鏡觀察洋蔥表皮，用圖畫記錄觀察到的洋蔥表皮細(xì)胞。
3、對比用肉眼、放大鏡、顯微鏡看到的洋蔥表皮各有什么不同。
實(shí)驗(yàn)重點(diǎn)：
用顯微鏡觀察洋蔥表皮細(xì)胞。
實(shí)驗(yàn)難點(diǎn)：
正確使用顯微鏡。
實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備：
分組實(shí)驗(yàn)器材：顯微鏡、洋蔥、小刀、清水、滴管、吸水紙、載玻片、蓋玻片、鑷子、放大鏡等。實(shí)驗(yàn)過程：
一、導(dǎo)入課題
出示洋蔥。問：如果從它的內(nèi)表皮上揭下一塊，用顯微鏡來觀察能看到些什么呢？（板書課題）
二、制作洋蔥表皮玻片標(biāo)本
1、師講解并演示制作洋蔥表皮玻片標(biāo)本的方法與步驟。
（1）在一個(gè)干凈的玻璃載片中間滴一滴清水；
�。�2）用小刀在洋蔥鱗葉片內(nèi)壁劃一個(gè)“井”字，用鑷子取下“井”中洋蔥內(nèi)表皮放到載玻片的水滴中央，注意標(biāo)本要平展開，不能折疊；
�。�3）用蓋玻片傾斜著蓋到標(biāo)本上面，放蓋玻片時(shí)，先放一端，再慢慢放下另一端，注意不要有氣泡。如水不足，可沿蓋玻片邊緣滴加；若水分過多，可用吸水紙吸掉；
（4）從蓋玻片的一邊滴一滴稀釋的碘酒，并把玻片微微傾斜，再在蓋玻片的另一邊用吸水紙吸掉多余的水；
�。�5）洋蔥表皮玻片標(biāo)本做成可進(jìn)行觀察。
2、學(xué)生以組為單位自制玻片標(biāo)本（最好制三份裝片，便于下面的對比觀察），教師巡視指導(dǎo)（教育學(xué)生注意安全）。
三、觀察洋蔥表皮細(xì)胞
1、先用肉眼觀察洋蔥表皮將看到的'內(nèi)容畫在科學(xué)記錄本上。
2、再用放大鏡觀察洋蔥表皮將看到的內(nèi)容畫到科學(xué)記錄本上。
3、學(xué)生交流用肉眼和放大鏡分別觀察到什么？它們有何不同？
4、利用顯微鏡觀察洋蔥表皮細(xì)胞。
�。�1）、出示顯微鏡，引導(dǎo)學(xué)生認(rèn)識顯微鏡，簡介各部分的名稱、功能及使用方法，學(xué)生每5人一組操作熟悉顯微鏡。
�。�2）、各組利用顯微鏡觀察洋蔥表皮細(xì)胞。（師操作演示：安放――對光――上片――調(diào)焦――觀察。生一步步跟著操作。）
（3）、學(xué)生觀察、記錄、描畫洋蔥表皮細(xì)胞。教師巡視指導(dǎo)，各組的實(shí)驗(yàn)組長監(jiān)督組員操作是否規(guī)范，要求每個(gè)人都要操作、都要觀察，并將觀察結(jié)果進(jìn)行交流。組長將大家在顯微鏡下的發(fā)現(xiàn)畫到科學(xué)記錄本上。
5、全班交流在顯微鏡下的發(fā)現(xiàn)。
�。�1）各組推薦發(fā)言代表談自己的發(fā)現(xiàn)。
�。�2）各組將所畫的觀察結(jié)果向全班展示。
（3）交流討論評價(jià)。
6、師小結(jié)：我們發(fā)現(xiàn)放大鏡比肉眼、顯微鏡比放大鏡看到的細(xì)節(jié)更多，更清楚。我們發(fā)現(xiàn)洋蔥表皮是由一個(gè)個(gè)比較規(guī)則的多邊形組成的，而且大多呈長方形，外為細(xì)胞壁，內(nèi)為無色細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核。洋蔥表皮上的一個(gè)個(gè)小房間似的結(jié)構(gòu)，就是洋蔥的細(xì)胞。（師一邊描述一邊畫洋蔥細(xì)胞簡圖）
四、實(shí)驗(yàn)結(jié)束。
回收實(shí)驗(yàn)器材，整理實(shí)驗(yàn)桌。
微生物實(shí)驗(yàn)報(bào)告 2
實(shí)驗(yàn)名稱：
用高倍顯微鏡觀察葉綠體和細(xì)胞質(zhì)流動(dòng)
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/strong>
1.初步掌握高倍顯微鏡的使用方法。
2.觀察高等植物的葉綠體在細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)中的形態(tài)和分布
二、實(shí)驗(yàn)原理
高等植物的葉綠體呈橢球狀,在不同的光照條件下,葉綠體可以運(yùn)動(dòng),改變橢球體的方向,這樣既能接受較多的光照,又不至于被強(qiáng)光灼傷。在強(qiáng)光下,葉綠體以其橢球體的側(cè)面朝向光源;在弱光下,葉綠體以其橢球體的正面朝向光源。因此,在不同光照條件下采集的葫蘆蘚,其小葉內(nèi)葉綠體橢球體的形狀不完全一樣。活細(xì)胞中的細(xì)胞質(zhì)處于不斷的流動(dòng)狀態(tài)，觀察細(xì)胞質(zhì)的流動(dòng)，可以用細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)中的葉綠體的運(yùn)動(dòng)做為標(biāo)志。
三、材料用具
蘚類的.葉，新鮮的黑藻，顯微鏡，載玻片，蓋玻片，滴管，鑷子，刀片，培養(yǎng)皿，鉛筆
四、實(shí)驗(yàn)過程（見書Ｐ30）
1、制作蘚類葉片的臨時(shí)裝片
2、用顯微鏡觀察葉綠體
3、制作黑藻葉片臨時(shí)裝片
4、用顯微鏡觀察細(xì)胞質(zhì)流動(dòng)
五、討論
1、細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)中的葉綠體是否靜止不動(dòng)，為什么？
2、葉綠體的形態(tài)和分布與葉綠體的功能有什么關(guān)系？
3、植物細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)處于不斷的流動(dòng)狀態(tài)，這對于活細(xì)胞完成生命活動(dòng)有什么意義？
4、用鉛筆畫一個(gè)葉片細(xì)胞，標(biāo)出葉綠體的大致流動(dòng)方向
微生物實(shí)驗(yàn)報(bào)告 4
實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c要求：
掌握霉菌與酵母菌的接種與培養(yǎng)方法。
實(shí)驗(yàn)原理：
接種是微生物實(shí)驗(yàn)及科學(xué)研究中一項(xiàng)基本操作技術(shù)。根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵螅?/p>
選擇合適的接種工具與接種方法，接種工具有接種環(huán)、接種針、接種鏟、接種鉤、吸管、滴管、棉簽等。常用接種方法有：斜面接種，液體接種，穿刺接種，平板接種和固體接種。接種的關(guān)鍵是無菌操作。
無菌操作的原則：在酒精燈火焰旁進(jìn)行，所有器皿均須嚴(yán)格消毒，培養(yǎng)基應(yīng)事先做無菌試驗(yàn)，
接種工具使用前后須經(jīng)火焰燒灼滅菌，棉塞不能亂放，始終夾在手指中。在培養(yǎng)四大類微生物時(shí)應(yīng)注意選擇適宜的培養(yǎng)條件。多數(shù)細(xì)菌為專性需氧菌與兼性需氧菌，少數(shù)為厭氧菌。多數(shù)食品腐敗菌和工業(yè)用菌種，以及人和動(dòng)物病原菌的最適生長溫度為37℃，并且在近中性（PH6.5～7.5）條件下生長良好。多數(shù)放線菌為好氧菌，少數(shù)為厭氧菌，最適生長溫度為28～30℃，多數(shù)適宜在偏堿性環(huán)境中生長（PH7.5～8.5）。
實(shí)驗(yàn)材料與方法
�。�1）實(shí)驗(yàn)材料：實(shí)驗(yàn)設(shè)備：溫箱。
實(shí)驗(yàn)器材：毛霉、曲霉、青霉、根霉、啤酒酵母、白假絲酵母、新生隱球酵母菌、細(xì)黃鏈霉菌、PDA平板、高鹽察氏平板、高氏合成I號平板、塑料筐、20%甘油水溶液、鑷子、接種鏟、無菌蓋玻片、無菌濾紙、無菌載玻片、石棉網(wǎng)、牛皮紙、硫酸紙、橡皮筋、鐵絲筐等。
�。�2）實(shí)驗(yàn)方法：平板接種：毛霉→PDA平板（點(diǎn)植法）
啤酒酵母→PDA平板（五區(qū)分離劃線法）青霉、曲霉→PDA平板（連續(xù)劃線法）
小室載玻片培養(yǎng)法：
1、取滅菌后小室平皿。
2、取無菌PDA瓊脂薄層平板，用鑷子夾住蓋玻片切割成0.5～1.0cm2的瓊脂塊，并將其移至培養(yǎng)小室中的載玻片上，制作過程注意無菌。
3、用接種環(huán)取少量霉菌的孢子接種于培養(yǎng)基四周，用無菌鑷子
將蓋玻片覆蓋在瓊脂塊上，并滅菌的`20%甘油（用于保持濕度），蓋上皿蓋，標(biāo)記，置28～30℃培養(yǎng)3～5d
糧食產(chǎn)品的平板接種：
1、取糧食樣品20g,放入無菌燒杯，加無菌水洗滌，反復(fù)10次，棄去水后，將糧粒倒于平皿內(nèi)備用
2、鑷子取糧食種入PDA瓊脂內(nèi)，每皿可接種5-10粒。
放線菌的接種：取細(xì)黃鏈霉菌劃線法接種，在接種的劃線處，無菌操作斜插入蓋玻片數(shù)張。
注意事項(xiàng)：
1.空氣環(huán)境無菌（應(yīng)在酒精燈火焰周圍無菌區(qū)）
2.在酒精燈火焰處，傾斜打開瓶口。
3.接種環(huán)使用前，直接在酒精燈上燒灼滅菌，把環(huán)和金屬絲燒紅即可。
4.接種環(huán)使用后，先在火焰周圍把環(huán)上標(biāo)本烤干，再燒灼滅菌，以免標(biāo)本汽化，爆烈四濺，污染環(huán)境。5.金屬桿快速通過火焰2－3次，殺滅表面微生物
分析與討論
1、糧食中產(chǎn)毒真菌的種類及產(chǎn)生毒素？
青霉、毛霉、曲霉、根霉、酵母、白念、細(xì)黃鏈霉菌（放線菌）青霉素、絲生毛霉素、黃曲霉素、根霉素、白念菌素。細(xì)黃鏈菌素
2、常用霉菌培養(yǎng)基有哪些？
馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基
豆芽汁葡萄糖（或蔗糖）瓊脂培養(yǎng)基察氏培養(yǎng)基
3、霉菌的接種方法有何不同？為什么？
�。�1）連續(xù)劃線法（青霉、曲霉）
青霉與曲霉為局限性生長的霉菌。應(yīng)采用連續(xù)劃線接種法接種。
�。�2）點(diǎn)植法（根霉、毛霉）
根霉與毛霉生長區(qū)域比較大，應(yīng)采用點(diǎn)植法。
�。�3）小室載玻片培養(yǎng)法（青霉、毛霉、根霉、曲霉）
微生物實(shí)驗(yàn)報(bào)告 5
一、實(shí)驗(yàn)名稱：
用顯微鏡觀察洋蔥表皮細(xì)胞
二、實(shí)驗(yàn)材料：
顯微鏡、洋蔥表皮細(xì)胞切片，及其他細(xì)胞裝片。
三、實(shí)驗(yàn)步驟：
1、右手握住鏡臂，左手托住鏡座，把顯微鏡向著光放在實(shí)驗(yàn)臺上。
2、對光：轉(zhuǎn)動(dòng)轉(zhuǎn)換器，使低倍物鏡對準(zhǔn)通光孔。
3、調(diào)節(jié)載物臺下的反光鏡，從目鏡往下看，能看見亮的光圈。
4、觀察：調(diào)節(jié)粗準(zhǔn)焦螺旋，把所要觀察的洋蔥表皮切片放在載物臺上，用壓片夾夾住，標(biāo)本要正對通光孔的.中央。
5、左眼向目鏡內(nèi)看，同時(shí)轉(zhuǎn)動(dòng)粗準(zhǔn)焦螺旋等，直到看清切片上的細(xì)胞為止，最后整理器材。
四、使用注意事項(xiàng)：
1、取送顯微鏡時(shí)，應(yīng)右手握住鏡臂,左手托住鏡座，輕拿輕放。
2、鏡檢時(shí)，坐姿端正，一般用左眼觀察物象，用右眼看著實(shí)驗(yàn)報(bào)告紙畫圖。兩眼須同時(shí)睜開。
3、切忌一面從目鏡進(jìn)行觀察，一面使鏡筒下降，這樣容易使物鏡與玻片標(biāo)本碰撞而損壞。
4、在高倍鏡下調(diào)節(jié)焦距時(shí)，切勿使用粗調(diào)節(jié)器，以免壓壞標(biāo)本，損壞物鏡。
5、顯微鏡使用完畢必須先上升鏡筒，移開鏡頭后再取出玻片標(biāo)本，以免取玻片時(shí)擦損鏡頭的鏡面。
五、實(shí)驗(yàn)原理：
利用教學(xué)顯微鏡觀察洋蔥表皮細(xì)胞。
六、創(chuàng)新點(diǎn)：
在實(shí)驗(yàn)過程中為學(xué)生提供多種細(xì)胞裝片，以供學(xué)生操作、觀察，增加了學(xué)生動(dòng)手實(shí)驗(yàn)的時(shí)間，使學(xué)生在實(shí)驗(yàn)中經(jīng)歷調(diào)節(jié)顯微鏡的焦距的過程，從而熟練掌握教學(xué)教學(xué)顯微鏡的使用方法。
微生物實(shí)驗(yàn)報(bào)告 6
一、實(shí)驗(yàn)名稱
用高倍顯微鏡觀察葉綠體和細(xì)胞質(zhì)流動(dòng)
二、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/strong>
1、初步掌握高倍顯微鏡的使用方法。
2、觀察高等植物的葉綠體在細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)中的形態(tài)和分布
三、實(shí)驗(yàn)原理
高等植物的葉綠體呈橢球狀，在不同的光照條件下，葉綠體可以運(yùn)動(dòng)，改變橢球體的方向，這樣既能接受較多的`光照，又不至于被強(qiáng)光灼傷。在強(qiáng)光下，葉綠體以其橢球體的側(cè)面朝向光源；在弱光下，葉綠體以其橢球體的正面朝向光源。因此，在不同光照條件下采集的葫蘆蘚，其小葉內(nèi)葉綠體橢球體的形狀不完全一樣�；罴�(xì)胞中的細(xì)胞質(zhì)處于不斷的流動(dòng)狀態(tài)，觀察細(xì)胞質(zhì)的流動(dòng)，可以用細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)中的葉綠體的運(yùn)動(dòng)做為標(biāo)志。
四、材料用具
蘚類的葉，新鮮的黑藻，顯微鏡，載玻片，蓋玻片，滴管，鑷子，刀片，培養(yǎng)皿，鉛筆
五、實(shí)驗(yàn)過程（見書p30）
1、制作蘚類葉片的臨時(shí)裝片
2、用顯微鏡觀察葉綠體
3、制作黑藻葉片臨時(shí)裝片
4、用顯微鏡觀察細(xì)胞質(zhì)流動(dòng)
六、討論
1、細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)中的葉綠體是否靜止不動(dòng)，為什么？
2、葉綠體的形態(tài)和分布與葉綠體的功能有什么關(guān)系？
3、植物細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)處于不斷的流動(dòng)狀態(tài)，這對于活細(xì)胞完成生命活動(dòng)有什么意義？
4、用鉛筆畫一個(gè)葉片細(xì)胞，標(biāo)出葉綠體的大致流動(dòng)方向。
微生物實(shí)驗(yàn)報(bào)告 7
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/strong>
1、熟悉常用微生物培養(yǎng)基（牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基）的配制方法。
2、學(xué)習(xí)各種無菌操作技術(shù)，并用此技術(shù)進(jìn)行為微生物稀釋分離、劃線分離接種。
3、用平板劃線法和稀釋涂布平板發(fā)分離微生物。
4、認(rèn)識為微生物存在的普遍性，體會(huì)無菌操作的重要性。
5、掌握分離產(chǎn)淀粉酶微生物的試驗(yàn)方法和步驟，了解產(chǎn)淀粉酶的微生物種類及形態(tài)。
二、實(shí)驗(yàn)原理
土壤是微生物生活的大本營，是尋找和發(fā)現(xiàn)有重要應(yīng)用潛力的微生物的主要菌源。不同土樣中各類微生物數(shù)量不同，一般土壤中細(xì)菌數(shù)量最多，其次為放線菌和霉菌。一般在較干燥，偏堿性、有機(jī)質(zhì)豐富的土壤中放線苗數(shù)量較多；酵母菌在一般土壤中的數(shù)量較少，而在水果表皮、葡萄園、果園土中數(shù)量多些。本次實(shí)驗(yàn)從土壤中分離產(chǎn)淀粉酶的微生物，應(yīng)該取那些富含產(chǎn)淀粉酶的微生物的土樣。從復(fù)雜的.微生物群體中獲得只含有一種或某一類型微生物的過程稱為微生物的分離與純化。常用的方法有
1、簡單單細(xì)胞挑取法
2、平板分離法和稀釋涂布平板法
此次實(shí)驗(yàn)采取的是平板分離法和稀釋涂布平板法結(jié)合，該方法操作簡單，普遍用于微生物的分離與純化。其原理包括：
1)稀釋后的細(xì)胞懸液圖不在平板上可以分離得單個(gè)菌株
2)在適合于待分離微生物的生長條件（如營養(yǎng)、酸堿度、溫度與氧等）下培養(yǎng)微生物，或加入某種抑制劑造成只利于待分離微生物的生長，而抑制其他微生物生長的環(huán)境，從而淘汰一些不需要的微生物。
3)微生物在固體培養(yǎng)基上生長形成的單個(gè)菌落可以是由一個(gè)細(xì)胞繁殖而成的集合體。因此可通過挑取單菌落而獲得純培養(yǎng)。獲得單菌落的方法可通過稀釋涂布平板或平板劃線等方法完成。
以淀粉作為惟一碳源的培養(yǎng)基培養(yǎng)未分離細(xì)菌，能產(chǎn)淀粉酶的細(xì)菌能生長，且菌落周圍出現(xiàn)透明圈（淀粉不透明，被消化后變透明），則產(chǎn)淀粉酶微生物被分離出來。本實(shí)驗(yàn)采用透明圈檢驗(yàn)法檢測培養(yǎng)物中是否有產(chǎn)淀粉酶微生物的生長。
三、實(shí)驗(yàn)儀器及試劑
1、器材：
培養(yǎng)皿、載玻片、蓋玻片、普通光學(xué)顯微鏡、量筒、滴管、吸水紙、燒杯、三角瓶、酒精燈、玻璃棒、接種環(huán)、鑷子、恒溫培養(yǎng)箱、高壓蒸汽滅菌鍋、天平、濾紙、pH試紙等。
2、試劑：
配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的原料（牛肉膏、NaCl、瓊脂、蛋白胨）、淀粉、盧戈氏碘液、蒸餾水、250ml三角瓶中裝90ml無菌水加20粒玻璃珠，作稀釋用等。
3、土樣：
取自貴州大學(xué)農(nóng)生樓后土壤10g，地下10cm左右。
四、實(shí)驗(yàn)步驟：
1、配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基：
1）配制牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基400ml（用于11個(gè)平皿和7支試管斜面）牛肉膏0.5%…………………………………2g
蛋白胨1%……………………………………4g
NaCl0.5%…………………………………..2g
瓊脂2%……………………………………..8g
淀粉0.5%........................................2g
pH……………………………………7.0~7.2
（2）無菌水的制備
分別取9ml蒸餾水加入5支試管中，加塞后用報(bào)紙包扎捆綁，放入高壓蒸汽滅菌鍋滅菌備用。取90ml蒸餾水加入250ml三角瓶中，同樣的操作，滅菌備用。
�。�3）器皿的準(zhǔn)備
將刻度吸管用報(bào)紙包扎，培養(yǎng)皿裝入專用滅菌杯分別放入高溫滅菌箱滅菌備用。
2）倒11個(gè)平板和7支試管斜面，包扎，0.1Mp、121℃、滅菌30min.
2、制備土壤稀釋液：
稱取土樣10g，放入盛有250ml無菌水的帶有玻璃珠的三角瓶中，振蕩搖勻10min使土和水充分混合，然后用移液槍從三角瓶中吸取1ml（此操作要求無菌操作），加入另一盛有9ml無菌水的試管中，混合均勻，以此類推分別制成制成0.01、0.001、0.0001、0.00001、0.000001不同稀釋度的土壤溶液。
3、涂布培養(yǎng)：
0.00001、0.000001濃度的土壤稀釋液作為涂布平板培養(yǎng)的對象，將其分別涂布在3個(gè)牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中，共6個(gè)培養(yǎng)基，標(biāo)號，37°C溫箱培養(yǎng)48h。
4、選取目的菌株：
兩天后對土壤溶液的微生物培養(yǎng)基進(jìn)行觀察，并取兩個(gè)菌落形態(tài)完全一致的分散的單個(gè)菌落，對其中一個(gè)噴灑盧戈氏碘液，觀察其菌落周圍是否出現(xiàn)透明圈，如果出現(xiàn)透明圈說明此菌株產(chǎn)淀粉酶，是目的菌株，記錄細(xì)菌明顯的性狀。
微生物實(shí)驗(yàn)報(bào)告 8
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/strong>
�。ㄒ唬┱莆找话闩囵B(yǎng)基的制備原理及要求，掌握培養(yǎng)基酸堿度的測定，熟悉一般培養(yǎng)基的制備過程和各種器皿滅菌方法。
�。ǘ┱莆占�(xì)菌分離培養(yǎng)的基本要領(lǐng)和方法，掌握細(xì)菌抹片的制備方法和革蘭氏染色法及油鏡的使用方法，并認(rèn)識革蘭氏染色的反應(yīng)特性。
�。ㄈ┱莆諏W(xué)習(xí)用微生物學(xué)原理診斷疾病的一般方法及步驟。
二、實(shí)驗(yàn)用品
�。ㄒ唬┢鞑�
量筒、燒杯、電子天平、漏斗、三角燒瓶、空試劑瓶、玻璃棒、玻璃平皿、刻度吸管、ph試紙、紗布、脫脂棉、天平、電爐、試劑瓶瓶塞、扎繩、放大鏡、包裝紙、洗耳球、酒精燈、載玻片、火柴、吸水紙、剪刀、記號筆、接種環(huán)、注射器、鑷子、鉗子、毫米尺、培養(yǎng)箱、水浴培養(yǎng)箱、高壓蒸汽滅菌鍋、油鏡
�。ǘ┰噭┘安牧�
肘胨、蛋白胨、豬膽鹽、氯化鈉、瓊脂、乳糖、0.01%結(jié)晶紫水溶液、0.5%中性紅水溶液、血清、胰化蛋白胨、酵母提取物、氫氧化鈉、鹽酸、牛血清、革蘭氏染色液、蒸餾水、小白鼠、病豬內(nèi)臟
三、實(shí)驗(yàn)步驟
�。ㄒ唬┡囵B(yǎng)基的制備
�。ㄋ杏玫降钠髅蠖家�121℃高壓滅菌15~30min，傾注平板在無菌操作臺內(nèi)完成，并放在無菌操作臺內(nèi)）
1、麥康凱培養(yǎng)基
�。�1）組成：蛋白胨17g、肘胨3g、豬膽鹽5g、氯化鈉5g、瓊脂17g、乳糖10g、0.01%結(jié)晶紫水溶液10ml、0.5%中性紅水溶液5ml、蒸餾水1000ml
�。�2）方法：將蛋白胨、肘胨、豬膽鹽和氯化鈉溶解于400ml蒸餾水中，調(diào)節(jié)ph至7.2。將瓊脂加入600ml蒸餾水中，并加入乳糖，加熱熔化。將兩液混合，分裝于燒瓶內(nèi)，用紗布、扎繩等捆好后，121℃高壓滅菌15~30min。待冷卻至50~ 55℃時(shí)，加入結(jié)晶紫和中性紅水溶液，搖勻后傾注平板。
注：結(jié)晶紫和中性紅水溶液配好后需經(jīng)高壓滅菌。
2、血清平板
�。�1）組成：營養(yǎng)瓊脂、牛血清
�。�2）方法：將滅菌的營養(yǎng)瓊脂加熱熔化，冷卻至45~50℃時(shí)，加入牛血清，并混勻，傾注平板。
注：不得將牛血清一并加入后再滅菌。
3、lb培養(yǎng)基
�。�1）組成：胰化蛋白胨10g、酵母提取物5g、氯化鈉10g、瓊脂15g
�。�2）方法：在950ml蒸餾水中加入胰化蛋白胨、酵母提取物、瓊脂和氯化鈉，調(diào)節(jié)ph至7.4，加熱熔化，分裝于瓶中，用紗布、扎繩等捆好后，121℃高壓滅菌15~30min。待冷卻至50~ 55℃時(shí)，傾注平板。
4、液體培養(yǎng)基（在lb培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，裝入大試劑瓶中，不加瓊脂，不分裝）
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在病豬死亡后，首先用顯微鏡檢查其末梢血液膜片中是否有炭疽桿菌存在，未發(fā)現(xiàn)，則立即用消毒的器械對其進(jìn)行生理解剖，觀察其病理特征現(xiàn)象，取出病豬的十二指腸、胃、肝臟三處的組織物，并注意組織的完整性，用儲物袋密封保存。
（三）細(xì)菌粗培養(yǎng)
1、消毒滅菌：操作人員先用消毒水清洗手或戴好實(shí)驗(yàn)手套，再用消毒水對無菌操作臺內(nèi)桌面及用酒精燈外焰對待用器械進(jìn)行火焰滅菌。
2、接種
�。�1）在無菌操作臺酒精燈旁打開用儲物袋密封保存的病料，先左手持鑷子右手持剪刀，把病料剪出一個(gè)小口。
（2）右手持滅過菌的接種環(huán)，左手持平板，并用拇指、食指及中指將平皿揭開約20左右，然后將接種環(huán)前端插入小口旋轉(zhuǎn)一下后，再用劃線接種的方法接種到一個(gè)血清平板上。
（3）用記號筆在平板底部作好日期、操作人員、部位等標(biāo)記，并將平板倒放。
以此方法，分別接種十二指腸、胃粘膜、肝臟于血清平板上，各接種2個(gè)血清平板。
3、培養(yǎng)：將接種好的血清平板倒扣放入37℃培養(yǎng)箱中，反向培養(yǎng)24小時(shí)。注：劃線接種時(shí)盡量劃開，以保證長出單個(gè)菌落，且劃線時(shí)接種環(huán)應(yīng)盡量傾斜，以免劃破培養(yǎng)基（后同）；待接種完畢后熄滅無菌操作臺內(nèi)酒精燈，關(guān)閉好無菌操作臺窗口，打開無菌操作臺內(nèi)的紫外燈。 。
（四）細(xì)菌純培養(yǎng)
1、菌落特征判斷
待粗培養(yǎng)的細(xì)菌培養(yǎng)24小時(shí)后，取出用放大鏡觀察記錄單個(gè)小菌落的形態(tài)特征并用實(shí)驗(yàn)報(bào)告紙記錄好，并在平板底部上做好觀察標(biāo)記，其形態(tài)特征包括大小、形狀、菌落邊緣、表面構(gòu)造、隆起度、濕潤度、透明度、顏色等。
2、取單個(gè)菌落進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢
�。�1）取干凈的載玻片，用記號筆在其一面做好正反面標(biāo)記，再在載玻片另一面中央滴上一小滴蒸餾水。
�。�2）將接種環(huán)在火焰上滅菌，待冷卻后，在酒精燈旁從標(biāo)記的單個(gè)小菌落中取少許細(xì)菌置于蒸餾水中混勻（同時(shí)蓋好平板倒扣置于一旁），用接種環(huán)涂成直徑約1.5cm的菌膜，再在酒精燈火焰上方以鐘擺速度通過固定好細(xì)菌，待冷卻進(jìn)行染色。
�。�3）先滴加草酸結(jié)晶紫溶液染色1~2min，再水洗；然后滴加革蘭氏碘液溶液染色1~2min，再水洗；隨后滴加95%的酒精脫色30~60s，再水洗；最后滴加稀釋的品紅進(jìn)行復(fù)染30~60s，再水洗；待干燥或吸水紙吸干后鏡檢。
�。�4）將干燥的載玻片放在1000倍油鏡下，滴加一滴松柏油進(jìn)行鏡檢，觀察其形態(tài)特征，判斷細(xì)菌的種屬。
3、細(xì)菌接種培養(yǎng)
（1）消毒滅菌：操作人員先用消毒水清洗手或戴好實(shí)驗(yàn)手套，再用消毒水對無菌操作臺內(nèi)桌面及用酒精燈外焰對待用器械進(jìn)行火焰滅菌。
�。�2）接種：右手持滅過菌的接種環(huán)，左手持平板，并用拇指、食指及中指將平皿揭開約20左右，然后將接種環(huán)插入揭開的.平板口內(nèi)蘸去一下鏡檢標(biāo)記的小菌落，再用劃線接種的方法接種到一個(gè)血清平板、lb平板或麥康凱平板上。并用記號筆在平板底部作好日期、操作人員、菌種、部位等標(biāo)記，將平板倒放。
�。�3）將接種好的平板倒扣放入37℃培養(yǎng)箱中，反向培養(yǎng)24小時(shí)。
注：油鏡用完后應(yīng)立即清理物鏡上的松柏油；劃線接種時(shí)盡量劃開，以保證長出單個(gè)菌落；待接種完畢后熄滅無菌操作臺內(nèi)酒精燈，關(guān)閉好無菌操作臺窗口，打開無菌操作臺內(nèi)的紫外燈。 。
（五）菌液的制備
1、鏡檢：用革蘭氏染色法在1000倍油鏡下鏡檢，觀察并記錄是否為純培養(yǎng)的細(xì)菌。
2、分裝液體培養(yǎng)基：先對無菌操作臺及需要使用的器械進(jìn)行消毒滅菌，然后用鉗子揭開一個(gè)空試劑瓶，用傾倒的方法在酒精燈旁從液體培養(yǎng)基大試劑瓶中分裝于空試劑瓶內(nèi)，并立即蓋上液體培養(yǎng)基大試劑瓶瓶塞。
3、接種：右手持接種環(huán)，用火焰對其進(jìn)行滅菌，待冷卻后，取出純培養(yǎng)的平板，在無菌操作臺內(nèi)酒精燈旁，蘸去少許細(xì)菌，左手傾斜液體培養(yǎng)基，將接種環(huán)，伸入液體培養(yǎng)基內(nèi)攪動(dòng)，然后取出對接種火焰環(huán)滅菌，并用滅菌的包裝紙捆綁好后，用記號筆做好相應(yīng)標(biāo)記，置于一旁。
4、培養(yǎng)搖菌：將接種好的液體培養(yǎng)基置于水浴培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)。注：分裝一個(gè)培養(yǎng)基就接種一個(gè)培養(yǎng)基，不得全部分裝完后再一個(gè)一個(gè)接種。
�。┬∈笾虏⌒詫�(shí)驗(yàn)
1、保定：選擇健康的青壯年小白鼠，先用右手抓住尾巴，旋轉(zhuǎn)數(shù)周讓其眩暈，然后用左手的拇指和食指捏住兩耳及頭部皮膚，并翻轉(zhuǎn)左手，使其頭部朝下，以達(dá)到內(nèi)臟前移的目的。
2、接種：先用酒精棉球蘸取酒精對注射部位擦洗消毒，再用注射器注射吸取0.2ml菌液注射于小白鼠腹腔中。
3、觀察：將接種的小白鼠放在適宜的環(huán)境下生活，并在鼠籠處用記號筆標(biāo)記好接種時(shí)間、菌種等。
4、再培養(yǎng)鑒定：待小白鼠死亡后，對其進(jìn)行解剖，觀察其內(nèi)臟病變情況，并取肝臟直接涂在相應(yīng)培養(yǎng)基上，在適宜條件下反向培養(yǎng)24小時(shí)后，取菌落細(xì)菌進(jìn)行鏡檢觀察判斷。
注：在注射小白鼠2小時(shí)候需要觀察小白鼠是否因注射時(shí)傷害到內(nèi)臟而死亡。
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